Tankoslojna kromatografija metoda je kemijske analize koja se temelji na uporabi sloja sorbenta debljine 0,1-0,5 mm kao stacionarne faze. TLC metoda može se koristiti u raznim poljima i omogućuje određivanje širokog spektra kemijskih spojeva.
Princip metode
Metoda tankoslojne kromatografije rođena je iz papirne kromatografije, a prvi pokusi provedeni su 80-ih godina 19. stoljeća. Aktivna uporaba ove analize započela je tek nakon 1938.
TLC tehnika uključuje mobilnu fazu (eluent), stacionarnu fazu (sorbent) i analit. Stacionarna faza se nanosi i učvršćuje na posebnoj ploči. Ploča može biti izrađena od stakla, aluminija ili plastike - to su podloge za višekratnu upotrebu koje se nakon svake uporabe moraju temeljito oprati, osušiti i pripremiti za nanošenje sorbenta. Također je moguće koristiti papirnate ploče koje se odlažu nakon upotrebe.
Silika gel se najčešće koristi kao stacionarna faza, ali moguće je koristiti i druge sorbense, na primjer, aluminijev oksid. Kada se koristi ovaj ili onaj sorbent, mora se strogo poštivati tehnologiju kako bi rezultat bio točan, na primjer, jer silikagel može dati netočne rezultate ako je zrak u laboratoriju prevlažan.
Kao mobilna faza koriste se otapala, na primjer voda, octena kiselina, etanol, aceton, benzen. Izbor otapala mora se uzeti odgovorno, jer rezultat kromatografije izravno ovisi o njegovim kvalitetama (viskoznost, gustoća, čistoća). Za svaki analizirani uzorak odabire se pojedinačno otapalo.
Analiza
Uzorak se mora razrijediti u otapalu. Ako se ne dogodi potpuno otapanje i ostane previše nečistoća, tada se uzorak može očistiti ekstrakcijom.
Nanošenje uzorka na ploču može se izvršiti automatski ili ručno. Automatsko nanošenje koristi metodu mikro raspršivanja pri čemu se svaki uzorak raspršuje na odgovarajuće područje podloge. Za ručnu primjenu koristi se mikropipeta. Oznake olovke stavljaju se na tanjur za svaki uzorak. Svaki uzorak nanosi se kapilarom na ploču u jednoj liniji na dovoljnoj udaljenosti od oznaka kako ne bi reagirao s ugljikom iz olova.
Ploča se stavlja u posudu, na čije se dno ulije eluent. Nosač se postavlja jednim rubom u posudu do označene crte. Posuda je dobro zatvorena kako bi se izbjeglo isparavanje mobilne faze. Pod djelovanjem kapilarnih sila, eluent se počinje uzdizati slojem sorbenta. Kad eluent dosegne određenu razinu, ploča se izvadi iz posude i osuši.
Ako željena tvar nema boju, tada neće biti vidljiva na podlozi. Stoga se vrši vizualizacija - obrada ploče s parom joda ili drugim bojama.
Nakon takve obrade ocjenjuje se rezultat. Na sorbentu se pojavljuju obojena područja različitog intenziteta. Da bi se odredila tvar (ili skupina tvari), obojena područja, njihova veličina, intenzitet i pokretljivost uspoređuju se s referentnim uzorkom.
TLC metoda se široko koristi jer je brza, jeftina, točna, intuitivna, ne zahtijeva složenu opremu i jednostavna je za tumačenje.
